利用中美冠科數據庫,快速查找所需模型
OncoExpress|HuBase|XenoBase|MuBase

博客

HUB organoid: 9大技術問題

2020-03-15

  •  
  •  
  •  

回顧我們最近的網絡研討會上關于HUB類器官開發的9大技術問題,Hubrecht organoid Technology (HUB)的科學總監Sylvia Boj博士進行了回答。

您能解釋一下HUB Organoids是如何產生的嗎?

我們的學術小組, Clevers 實驗室在多篇出版物中解釋了不同組織的HUB類器官的建立,并在之前的一篇博客文章中提到:

除了腸道干細胞,還分離過成體干細胞嗎?

我們已經鑒定出Lgr5+細胞在肝臟和胰腺誘導損傷后具有生成新細胞的能力

其他干細胞標記也已被確定,如:

是否可以從凍存組織中生成HUB 類器官?

是的,類器官可以從低溫保存的組織中產生。然而,這種方法的效率比使用新鮮組織的效率要低,所以我們只建議使用新鮮切除的組織,而不是凍存的生物樣本。

對類器官計數的較好的方法是什么?

我們正在評估市售的一些細胞計數器對類器官計數的效果。目前,我們對類器官細胞懸液進行稀釋,然后取10μl稀釋后的懸液畫一條長線(而不是一滴),數類器官個數進行計數。

HUB類器官如何擴增傳代?

通過將類器官分散成小塊,可以通過如下方式進行分散:

  • 吹打分散-用低黏附槍頭或玻璃管吹吸(玻璃管吹吸僅適用于種在200μl 基質膠中的類器官)。
  • 胰酶消化分散-加入胰酶(胰酶體積為25-50%),吹打分散。

我們推薦后一種方法用于緊實型類器官,緊實型類器官僅靠機械吹打很難分散。重要的一點是:我們并不是用傳統的胰酶消化方法(100%的胰酶在水浴鍋中孵育)來對類器官進行胰酶消化,這是因為,大部分的類器官模型,如果被消化成單細胞,僅有很少量的可以生長形成新的類器官。

類器官被分散后,離心,用新的ECM重懸。

關于傳代擴增-是否評估了不同代次之間類器官的基因特性?您推薦的最高傳代次數是什么?

對于從非癌組織生成的正常模型,類器官每周傳代一次,已經傳代擴增了一年。突變的累積與我們的體細胞的突變累積是類似的 (Huch et al. Cell 2015;(160):299-312; Blokzijl et al. Nature 2016;(7624):260-264)。

對于癌癥模型,腫瘤的本質是更多突變的累積或基因組不穩定性的獲得。當通過分離腫瘤產生一個新模型或收到一管凍存的類器官后,我們建議先生成一個主細胞庫(MCB),然后再生成一個工作細胞庫(WCB),復蘇WCB的類器官用于實驗。

根據類器官模型,每周傳代的類器官(如腸、胰腺或肝臟模型)擴增平均需要2-3個月。對于每15-18天傳代一次的模型(乳腺或肺模型),擴增需要4-5個月。

隨著傳代,類器官會有變化嗎?

胞外基質膠滴中類器官的密度和生長因子的質量對類器官生長是有很大影響的。如果不頻繁更換培養基,類器官鋪板太擁擠(擁擠意味著沒有足夠的信號來維持所有細胞的增殖)或太稀少,類器官細胞就會分化,這樣就失去了細胞增殖及其擴增的可能性。

類器官可以低溫凍存嗎?復蘇后可以立即使用嗎?

是的,類器官可以低溫保存。復蘇后,我們建議至少一段時間讓它們恢復。但如果實驗需要,類器官可以在復蘇后立即使用;在這種情況下,重要的是要有一個好的凍融方案,以確保復蘇后細胞活力在85%以上。

類器官可以用于芯片技術研究嗎?

是的,HUB正在與一些公司合作,在微流控板中使用類器官,而不是使用細胞系。到目前為止,我們已經在腸道和腎臟器官方面取得了一些不錯的結果。

如果您有任何進一步的技術問題,請與我們聯系。

Topics: Oncology

關注微信公眾號

尤尼克斯羽毛球