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為什么要使用同種型對照抗體

2018-06-26

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精確的實驗設計是藥物研發的關鍵。同型對照抗體的設計可優化治療性抗體研究中的研究表現和數據分析。

什么是同型對照抗體?

同型對照抗體是用于抗體藥物作用和體內/體外單克隆抗體(mAb)研究的陰性對照。同型對照符合測試/一抗特征,但是在針對常見的臨床前藥物研發中尚未發現;這意味著同型對照對靶抗原缺乏特異性。

在體內和體外測定中,信號可能來自各種結合情況。為了準確解釋檢測結果,區分結合情況至關重要,例如:

  • 抗原依賴性特結合mAb
  • 由于與Fc受體(FcR)或其他蛋白相互作用,非抗原依賴性結合mAb

同型對照抗體為mAb功能研究提供了理想的陰性對照,使研究人員能夠準確區分非特異性背景和特異性抗體信號。

為什么使用同型對照抗體?

通常,抗體在結構上彼此非常相似。抗體分子大部分是“恒定區”,其中相同同型的抗體有一樣的氨基酸序列。該恒定區通過與FcR結合有助于介導抗體作用機制(MOA)。mAb中的一個小的高變區實際上決定了抗原特異性結合和預期的治療效果。

在臨床前測試抗體時,需要控制每一個可能影響研究結果的變量。MOA介導和免疫細胞通過恒定區和Fc區可能對mAb功效產生影響。在研究設計中需要考慮這些因素。

使用對應的同型陰性對照(具有與測試/初級mAb相同的宿主種類,具有相同的種型、偶聯物、輕鏈和濃度)可以解釋這些添加的變量并且能夠進行更精確的數據分析。PBS等簡單的陰性對照不能產生相同的效果,與試驗品相比可能數據出錯。

同型對照對藥物研發有什么重要作用?

同型控制模擬廣泛的FcR功能

在體內藥效測定中需要同型對照抗體以模擬經由測試抗體的Fc區發生的廣泛的FcR功能。這種接觸僅在與同型對照相比時才能進行適當的分析。

例如,當在免疫腫瘤學研究中測試mAb體內效力時,可以根據同種型對照或PBS是否用作陰性對照來計算不同程度的腫瘤生長抑制(TGI)。因此,測試抗體的比較需要針對同型對照以確保抗體效果評估準確。

當與陰性對照(同型對照和PBS)比較時,可以觀察到腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)的變化。這些變化的程度隨模型而改變,使得在研究設計期間難以預期效果。因此使用適當的對照對免疫分析和下游結果分析非常重要。

在流式細胞術實驗中,同型對照可模擬FcR或其他蛋白非特異性結合和染色

在流式細胞術實驗中,測試抗體可通過與FcR或其他蛋白結合而引起非特異性染色。由于不同組織類型的FcR表達不同,非特異性染色可能會非常特異,混淆您的研究結果。匹配的同型對照可以模擬這種非特異性結合和染色,與使用PBS(不結合)相比,能夠更精確的分析。

在流式細胞術實驗的匹配同型對照抗體在技術上有點挑戰。所有同型對照對照分子應在使用前充分表征以避免產生誤導性結果。陰性對照應該匹配:

  • 種類
  • 重鏈
  • 輕鏈
  • FcR

由于這種復雜性,在流式細胞術實驗中使用的同型對照常常存在一些爭論。

同型對照是免疫組化實驗中的重要陰性對照

除了體內研究外,還能作為免疫組織化學(IHC)等檢測的陰性對照。當一抗濃度和同型相匹配時,同型對照是最理想的陰性對照。

直接進行二抗染色或用與原代相同物種的多克隆進行染色。然而,兩者都不可能匹配組織中的一抗同型或復制一抗結合模式以及同型對照抗體。

如果僅染色兩次,則會發生抗體直接結合的風險,而不是與同型對照物結合。單獨的二抗不會與一抗結合,因此它可以改變與抗原無關的結合特性。由于與FcR(因不同組織類型而異)相互作用,二抗同型也可以引起明顯的染色差異。

作為陰性對照的多克隆染色帶來了一些問題。這引入了免疫球蛋白的混合物,它可以結合不同的靶標、擴大范圍以及非特異性染色。

結語

同型對照抗體為精確的數據分析提供理想的陰性對照。與PBS這樣比較簡單的陰性對照不同,選擇同型對照將提供一系列的功能和特性。

Topics: Oncology

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