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AACR 2018小鼠同種異體移植腫瘤模型

2018-05-15

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我們在2018年AACR上展示了許多免疫腫瘤學模型相關數據,13張海報中有3張海報關于我們的新型小鼠同種異體移植腫瘤模型。近期,我們在審查KPC PDAC模型開發的新數據,這是對模型進行QC的新平臺,也可以用于免疫分型以更好地了解模型響應的變化。

2018年AACR 1144海報:建立Kras (G12D)/Trp53 null/Pdx1-cre (KPC)小鼠同種移植腫瘤模型,用于聯合免疫治療的藥效評估

研發胰腺導管腺癌(PDAC)的有效治療是當前的需求。PDAC有5年很低的生存率,能選擇的治療標準也很少,患者對較新的抗PD-1和CTLA-4免疫療法單藥產生耐藥性。研究人員正在嘗試將化療、小分子免疫調節劑和免疫檢查點抗體聯合用于治療這種癌癥,從而推動對相關免疫活性模型的需求。

KPC模型(Kras(G12D)/ Trp53 null / Pdx1-cre)是一個很好的開始,因為它們在形態學、免疫微環境和缺乏治療反應等方面能夠重現人類疾病。然而,由于腫瘤發展的自發性,親本模型很難用于藥理學研究,并且傳代成本昂貴。

小鼠同種移植腫瘤模型可以克服這些問題。他們將自發性腫瘤從GEMM /致癌物誘導的模型直接移植到免疫完全小鼠中,提供了PDX模型的鼠類。 我們現在開發了KPC鼠同種移植腫瘤模型,該海報詳細描述和驗證了用于組合免疫療法評估的模型。

KPC小鼠同種移植腫瘤模型驗證和免疫學概述

我們驗證了大量模型特征,首先確認皮下和原位KPC同種移植模型的組織病理學與原發性疾病和小鼠PDAC腫瘤是否類似,然后分析皮下和原位腫瘤。

這種免疫分型表明兩種模型具有相似的免疫環境,具有高水平的巨噬細胞和低水平的效應性CD4 +和CD8 + T細胞。(也顯示出M1-M2巨噬細胞極化)。

分析還顯示同種移植腫瘤模型表達低水平的PD-L1,這解釋了該模型對抗PD-L1治療的不良反應。免疫分型后處理類似于媒介治療的腫瘤(和治療前的腫瘤)缺乏應答。KPC模型還可以用于評估治療標準,同時皮下和原位模型對gemcitabine有抗藥性。

所有這些因素都意味著,KPC同種異體移植重現了原發疾病對一系列治療的反應不足,為評估免疫治療/聯合免疫治療提供了非常合適的模型。

我們的海報數據進一步證明了原位同種移植模型對新型免疫療法的應答,并增加了存活率。

小鼠同種移植腫瘤模型的可用性,其突變負荷比同基因模型更接近人類疾病。

海報還提供了整個小鼠同種異體腫瘤移植平臺的概況、可用模型以及與同基因型的變異負荷比較;小鼠同種異體移植模型具有較低的突變負荷,提供了與人類疾病更接近的小鼠腫瘤模型平臺。

2018年AACR 5116海報:小鼠腫瘤同種異體移植模型的發展及其遺傳指紋識別,以確保使用這些模型進行質量控制的I / O研究

隨著小鼠同種異體腫瘤移植系統在免疫腫瘤研究中的應用越來越多,為了確保正確的模型證明,對腫瘤進行跟蹤和檢測是十分重要的。由于小鼠腫瘤來源于有限的近親繁殖實驗,并且缺乏快速且簡單測定的標記,所以不像人源腫瘤(其中遺傳ID可以通過短串聯重復基因分型或HLA分型容易追蹤)那樣容易。

在這張海報中,我們詳細介紹了在小鼠腫瘤模型系統(包括同種異體移植和同基因模型)中建立新型、高效的模型質量控制和腫瘤ID方法。該測定基于腫瘤模型的遺傳分析以確定可以檢測到的獨特基因組特征(例如基因融合)作為鼠腫瘤模型ID的指紋。

實驗流程:

  1. 將原始細胞系或小鼠腫瘤進行RNAseq,以確定獨特的遺傳特征(基因融合)
  2. 然后用RT-PCR和Sanger測序來驗證在0段腫瘤中有相同基因融合
  3. 隨后測試樣本,發現同樣的融合
  4. 這說明融合沒有消失,是腫瘤的一個穩定特征,可以作為標志

我們驗證了小鼠同種異體移植模型和兩個同基因模型中的基因融合方法,證實了該方法是一種穩定的QC技術,并且獨特的遺傳特征可以作為小鼠模型ID和質量控制的遺傳指紋。

2018年AACR 4059海報:疫苗接種引起小鼠乳腺癌同種移植模型中腫瘤浸潤細胞亞型明顯轉變

通過在異種移植腫瘤模型上進行研究,得出作用機制。在2016年AACR展會上,我們提供了有關mBR6004乳腺癌同種異體移植模型的數據。該模型通過由MMTV-PyVT轉基因小鼠自發性形成的乳腺癌原位植入到FVB / N小鼠中得到。該模型和原始GEMM腫瘤具有相似的生長,轉移和組織病理學,并且對CTLA-4有響應,但對PD-1 / PD-L1抑制劑沒有反應。

我們在2016年AACR展覽的海報顯示,疫苗接種使得腫瘤對PD-1 / PD-L1阻斷有反應,表明宿主免疫激活會影響對檢查點抑制劑的反應。我們在2018年的海報進一步研究這些數據以揭示此反應機制。

從FoxP3lo 向 FoxP3hi轉變

這篇海報簡要介紹了小鼠同種異體腫瘤移植模型如何開發、使用的免疫表型標記以及揭示腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)表型的背后的控制機制,揭示了這種新反應背后的機制。

FACS數據顯示,在預先接種疫苗的腫瘤中,TIL-Treg從FoxP3lo向FoxP3hi群體急劇轉變,這可能與之前發表的簡單的FoxP3lo Treg和FoxP3hi效應Treg(eTreg)相對應。長期以來,FoxP3一直被認為是Treg的關鍵標志,最近的研究表明Treg與不同水平的FoxP3和相關功能變異有顯著的差異性。這表明了TIL在癌癥預后和對免疫腫瘤藥劑敏感性方面的相互沖突作用。

我們的海報表明,TIL-eTreg和Treg不同,可能在檢查點抑制劑治療的腫瘤反應中起關鍵作用。 這可能意味著通過事先接種疫苗以改變TIL-eTreg狀態可能成為加強檢查點抑制劑治療的重要方案。

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Topics: Oncology

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